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細胞復甦的步驟及注意事項

發表時間·▩•╃│:2022-12-22  |  點選率·▩•╃│:88
  細胞復甦✘☁☁☁✘,生物學的一種術語✘☁☁☁✘,是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細胞解凍之後重新培養✘☁☁☁✘,細胞恢復生長的過程✘↟。細胞凍存是細胞儲存的主要方法之一✘↟。利用凍存技術將細胞置於-196℃液氮中低溫儲存✘☁☁☁✘,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性儲存起來✘☁☁☁✘,這樣在需要的時候再復甦細胞用於實驗✘↟。
  細胞復甦的步驟·▩•╃│:
  ①將冷凍管從液氮中取出✘☁☁☁✘,迅速投入37℃水浴融化✘☁☁☁✘,細胞融化後要儘快(約1min)移出37℃水浴✘↟。37℃水浴時間延長會提高細胞死亡率✘☁☁☁✘,復甦過程中一般細胞死亡率在20%~25%之間✘↟。
  ②迅速用酒精棉球擦拭冷凍管外部殺菌消毒✘☁☁☁✘,然後放置在冰浴上✘↟。
  ③小心開啟瓶蓋✘☁☁☁✘,把細胞轉入含有4mL培養基的培養瓶中✘☁☁☁✘,然後把培養瓶移至培養箱✘☁☁☁✘,26℃~28℃培養1h✘☁☁☁✘,讓細胞貼壁✘↟。
  ④細胞貼壁後✘☁☁☁✘,小心移棄培養基✘☁☁☁✘,主要是去掉DMSO(懸浮生長細胞要透過離心沉澱除去DMSO)✘╃、死細胞及其碎片✘☁☁☁✘,加5mL新鮮培養基✘☁☁☁✘,26℃~28℃培養✘↟。
  ⑤細胞培養24h後✘☁☁☁✘,更換新鮮培養基✘☁☁☁✘,繼續培養直到形成單層✘☁☁☁✘,便可以傳代✘↟。
  ⑥詳細記錄復甦細胞的名稱✘╃、數量✘╃、復甦時間✘╃、存放部位等✘↟。
  細胞復甦的注意事項·▩•╃│:
  1✘╃、注意無菌操作✘↟。
  2✘╃、應在1-2min內使凍存液融化✘↟。如果復溫速度太慢✘☁☁☁✘,則會造成細胞損傷✘↟。另外✘☁☁☁✘,細胞復甦後的操作-好在4℃冰浴中進行✘☁☁☁✘,以減少冷凍保護劑對細胞的毒性✘↟。
  3✘╃、細胞復甦過程中✘☁☁☁✘,升溫的速率要大✘☁☁☁✘,把從液氮或-70℃冰箱中取出的細胞在短的時間內放入水浴鍋✘↟。
  4✘╃、細胞放入水浴中注意用鑷子夾住細胞凍存管並在水浴中不時晃動✘☁☁☁✘,使其受熱均勻✘☁☁☁✘,並防止水浴時水進入細胞凍存管汙染細胞✘↟。開啟細胞凍存管之前要用酒精棉球將凍存管消毒並晾乾✘↟。
  5✘╃、液氮操作有一定的危險性✘☁☁☁✘,開啟液氮罐取出細胞時✘☁☁☁✘,戴上防護眼鏡✘↟。
  6✘╃、如果凍存管密封不嚴✘☁☁☁✘,液氮可被吸入✘↟。由於解凍時凍存管中的氣溫急劇上升✘☁☁☁✘,將可能發生爆炸✘↟。復甦過程中應蓋上恆溫水浴鍋的蓋✘↟。
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